Sắc ký dựa ở trên khái niệm hệ số phân vùng. Phân vùng chất tan giữa hai dung môi chính là bất biến. Ứng dụng của sắc ký dựa ở trên việc chúng ta tạo một dung môi bất động (bằng phương pháp hấp phụ ở trên ma trận trợ giúp rắn) , và một thiết bị dịch chuyển. Nếu ma trận hỗ trợ hoặc pha tĩnh là cực như giấy, silica,…thì đó chính là sắc ký pha thuận còn nếu nó chưa phân cực (C-18) thì đó là pha ngược lại.
Bạn đang xem: Sắc ký chính là gì
Sắc ký là kỹ thuật quan trọng trong phòng thí nghiệm
Bạn đang đọc: Sắc ký là gì vậy? phương pháp dùng sắc ký cột trong thí nghiệm1. Sắc ký là gì vậy?
Sắc ký là một kỹ thuật phòng thí nghiệm để tách hỗn hợp. Hỗn hợp này đã được hòa tan trong một chất lỏng gọi là pha động, di chuyển qua một môi trường chứa vật liệu khác gọi là pha tĩnh. Những thành phần khác nhau của hỗn hợp di chuyển ở tốc độ khác nhau, khiến chúng tách ra. Sự phân tách dựa trên việc phân vùng khác biệt giữa những pha di động , và tĩnh. Sự khác biệt trong hệ số phân vùng của hợp chất dẫn đến sự lưu giữ vi sai trên pha tĩnh, từ đó ảnh hưởng đến sự phân tách.
2. Mục đích dùng của sắc ký
Sắc ký có thể là dùng để chuẩn bị hoặc phân tích:
– Sắc ký chuẩn bị được dùng để tách những thành phần của hỗn hợp để dùng cho những thí nghiệm sau này, thay vì phân tích. Đây đã được coi như một hình thức tinh chế.
– Sắc ký phân tích thường được thực hiện với lượng vật liệu nhỏ hơn và để thiết lập sự hiện diện hoặc đo tỷ lệ tương đối của chất phân tích trong hỗn hợp. Cả hai chưa loại trừ lẫn nhau.
3. Những thuật ngữ sắc ký
– Chất phân tích chính là chất cần tách trong quy trình sắc ký. Nó thường chính là những chất cần thiết phải lấy hỗn hợp ban đầu.
– Sắc ký phân tích đã được dùng để xác định sự tồn tại và nồng độ chất phân tích trong mẫu.
– Pha liên kết là pha tĩnh được liên kết cộng hóa trị với những hạt trợ giúp hoặc thành trong của ống cột.
– Sắc ký đồ là đầu ra trực quan của sắc ký. Trong trường hợp phân tách tối ưu, những đỉnh hoặc mẫu khác nhau trên sắc ký đồ tương ứng với những thành phần khác nhau của hỗn hợp được tách.
Cột x của sắc ký đồ biểu thị thời gian lưu
+ Trục x vẽ thời gian lưu
+ Trục y vẽ một tín hiệu tương ứng (Thí dụ thu đã được chỉ bằng máy đo quang phổ, máy quang phổ khối hoặc loại máy dò khác) đã được tạo bởi những máy phân tích thoát ra khỏi hệ thống.
+ Trong trường hợp hệ thống tối ưu, tín hiệu tỷ lệ thuận với nồng độ của chất phân tích chi tiết đã được tách ra.
– Máy sắc ký chính là thiết bị cho phép phân tách tinh vi như sắc ký khí hoặc tách sắc ký lỏng.
– Sắc ký chính là một phương pháp phân tách vật lý phân phối những thành phần để phân tách giữa hai pha, một pha (pha tĩnh), pha kia (pha động) di chuyển theo một hướng xác định.
Xem thêm: Bánh tráng xì ke và những điều chưa biết cần khám phá
– Dịch rửa giải chính là dung môi mang chất phân tích thuộc pha động rời khỏi cột, mọi người có thể gọi nó chính là nước thải.
– Eluite chính là chất phân tích, chất hòa tan.
– Eluotropic là một danh sách những dung môi được xếp hạng theo sức mạnh rửa giải của chúng.
– Pha bất động chính là pha tĩnh được cố định ở trên những hạt trợ giúp hoặc ở trên thành trong của ống cột.
Tổng quan về sự phân tách sắc tố của sắc tố quang hợp
– Pha động là pha di chuyển theo một hướng xác định.
+ Nó có thể là chất lỏng (LC , Điện hóa mao quản (CEC)), chất khí (GC) hoặc chất lỏng siêu tới hạn (sắc ký siêu tới hạn chất lỏng, SFC).
+ Pha động bao gồm mẫu đã được tách hoặc phân tích , dung môi di chuyển mẫu qua cột. Trong trường hợp sắc ký cột lỏng cao áp (HPLC), pha động bao gồm dung môi không phân cực như hexane ở pha thường hoặc dung môi phân cực như metanol trong pha ngược của sắc ký , và mẫu được tách ra.
+ Pha động di chuyển qua cột sắc ký (pha tĩnh) , mẫu tương tác với pha tĩnh cũng sẽ được tách ra.
– Thời gian lưu chính là thời gian đặc trưng để một chất phân tích chi tiết đi qua hệ thống (từ đầu vào cột đến đầu dò) trong những điều kiện đã đặt.
– Mẫu là nội dung được phân tích trong sắc ký. Nó có thể bao gồm một thành phần duy nhất hoặc một hỗn hợp của những thành phần.
– Chất tan chính là những thành phần mẫu trong sắc ký phân vùng.
– Dung môi là chất có khả năng hòa tan một chất khác, đặc biệt chính là pha động lỏng trong sắc ký lỏng.
– Pha tĩnh chính là chất cố định tại chỗ cho quá trình sắc ký như silica trong sắc ký lớp mỏng.
– Máy dò là công cụ đã được dùng để phát hiện định tính , định lượng những chất phân tích sau khi tách.
Máy dò giúp cho phát hiện định tính , và định lượng chất sau phân tích
4. Những kỹ thuật sắc ký
4.1. Sắc ký cột
Tham khảo thêm: Khi Nào Sau And Là Gì ? phương pháp Dùng Giới Từ Như Thế Nào
– Sắc ký cột là phương pháp sắc ký phân tách , định lượng sinh chất dưới áp suất cao, giúp cho giảm đáng kể thời gian và hiệu quả, chất lượng phân tích.
– những hạt của pha tĩnh hoặc hỗ trợ đã được phủ chỉ bằng pha tĩnh lỏng có thể lấp đầy toàn bộ thể tích bên trong ống hoặc tập trung dọc theo thành ống phía trong để tạo một đường dẫn mở, không giới hạn cho pha động phần giữa của ống (cột hình ống mở).
– Sự khác biệt về tốc độ di chuyển qua môi trường được tính theo thời gian lưu khác nhau của mẫu.
phương pháp dùng sắc ký cột trong thí nghiệm
4.2. Sắc ký Phosphocellulose
– Sắc ký Phosphocellulose dùng lực liên kết của nhiều protein liên kết DNA với phosphocellulose.
– Sự tương tác của protein với DNA càng mạnh thì nồng độ muối cần thiết để rửa giải protein càng cao.
4.3. Sắc ký giấy
– Sắc ký giấy chính là một kỹ thuật liên quan đến việc đặt một chấm nhỏ hoặc dòng dung dịch mẫu lên một dải giấy sắc ký. Giấy đã được đặt trong một thùng chứa với một lớp dung môi nông và niêm phong lại.
– Khi dung môi tăng qua giấy, nó gặp hỗn hợp mẫu và bắt đầu di chuyển lên giấy với dung môi.
– Giấy này đã được làm đến từ cenlluose, một chất phân cực , những hợp chất trong hỗn hợp di chuyển xa hơn nếu chúng chưa phân cực. Nhiều chất phân cực liên kết với giấy cellulose nhanh hơn, do đó chưa đi xa được.
Sắc ký giấy đã được thực hiện đến từ cenllulose
4.3. Sắc ký lớp mỏng (TLC)
– Sắc ký lớp mỏng (TLC) là một kỹ thuật phòng thí nghiệm được dùng rộng rãi để phân tách những hóa sinh khác nhau ở trên cơ sở những điểm thu hút tương đối của chúng đối với pha tĩnh và pha động.
– Nó tương tự như sắc ký giấy. Tuy nhiên, thay vì dùng pha giấy cố định, nó bao gồm pha tĩnh của một lớp chất hấp phụ mỏng như silica gel, alumina hoặc cenllulose ở trên đế phẳng, trơ.
– TLC thích hợp cho những ứng dụng sàng lọc như kiểm tra nồng độ thuốc , và độ tinh khiết của nước bởi khả năng nhiễm chéo thấp vì mỗi lần phân tách đã được thực hiện trên một lớp mới.
Sắc ký lớp mỏng thích hợp cho những ứng dụng sàng lọc
4.4. Sắc ký dịch chuyển
Nguyên tắc cơ bản của sắc ký dịch chuyển là một phân tử có ái lực cao với ma trận sắc ký (chất dịch chuyển) cạnh tranh tốt nhất cho những vị trí liên kết để thay thế tất cả những phân tử có ái lực thấp hơn.
Xem thêm: Pay For chính là gì , cấu trúc cụm đến từ Pay For trong câu Tiếng Anh
5. Mua giấy sắc ký Whatman chất lượng- giá tốt ở Hà Nội